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討論一下人肺癌細胞培養操作步驟及注意事項

發布時間:2021-10-22 點擊次數:394次
  人肺癌細胞由原先存在於原代培養物中的細胞世係所組成。初代培養物開始*次傳代培養後的細胞,即稱之為細胞係。如細胞係的生存期有限,則稱之為有限細胞係;已獲無限繁殖能力能持續生存的細胞係,稱連續細胞係或無限細胞係。無限細胞係大多已發生異倍化,具異倍體核型,有的可能已成為惡性細胞,因此本質上已是發生轉化的細胞係。無限細胞係有的隻有永生性(或不死性),但仍保留接觸抑製和無異體接種致癌性;有的不僅有永生性,異體接種也有致瘤性,說明已惡性化。
 
  人肺癌細胞培養操作步驟:
 
  1.人肺癌細胞細胞用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭幹淨,不要用紗布;
 
  2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
 
  3.在距離紫外燈直射範圍內20-30厘米處照射2-3小時;
 
  4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片完全浸在培養液中;
 
  5.將培養板在5%CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3麵積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗後即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
 
  人肺癌細胞注意事項:
 
  1、觀察細胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。
 
  2、瓶中運輸培養基不能重複再用,請換用加雙抗的新培養基,細胞凍存後,培養基中可不加任何抗生素。
 
  3、有些細胞貼壁不牢,如發現貼壁細胞有脫落,可離心吹打後接種到新瓶內。
 
  4、收到細胞後,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有汙染,請及時與芭乐APP下载。
 
  人肺癌細胞凍存和複蘇實驗原理:細胞凍存及複蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以zui大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞碸作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由於冰晶形成造成的細胞損傷。複蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化,避免由於緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。

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